BioSkryb二代测序建库试剂盒

BioSkryb Genomics公司推出的ResolveDNA和ResolveOME产品,ResolveDNA产品是基于新兴的原代模板定向扩增(PTA)技术的单细胞全基因组检测试剂盒,而ResolveOME产品则可以在此基础上同时检测同一个细胞内的全基因组、转录组及靶向蛋白,实现多组学分析,从而满足肿瘤及其微环境、细胞和基因治疗、神经发育、生殖健康等众多研究领域的应用需求。
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技术原理:

ResolveDNA单细胞全基因组扩增技术原理是基于PTA原代模板定向扩增技术,通过随机引物扩增和终止碱基的结合限制扩增产物的大小,使引物重定向到原代模板,从而提供均一无偏的扩增。

ResolveOME单细胞全基因组文库构建也是基于PTA扩增的技术,与此同时,还可实现同一个细胞内的单细胞转录组文库构建,其流程是先将细胞分选至96或384孔板中,再对分选好的细胞进行细胞膜裂解,释放出mRNA,将mRNA反转录并通过oligo dT引物进行cDNA一链合成,然后对核膜进行裂解,释放内部基因组DNA,用于全基因组扩增,扩增结束后,用磁珠将cDNA与全基因组DNA扩增链分离出来,对 cDNA链进行预扩增并构建转录组文库,对全基因组扩增产物构建全基因组文库,最后进行上机测序和数据分析得到全基因组和转录组信息。

高基因组覆盖度、分辨率和良好的均一性

分别使用MDA和PTA方法对单细胞进行全基因组扩增后得到的在1 号染色体上的 reads 覆盖深度的图,可以看出,用 PTA 方法得到的覆盖深度均一性要远远优于MDA 方法得到的覆盖深度。

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